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提升DNA原位合成质量,聚丙烯微孔膜等离子体设备活化处理

2021-05-25 14:27:54

基因芯片又称为寡核苷酸微阵列,它是借助定点固相合成技术或探针固定化技术,将一系列不同序列的寡核苷酸按阵列分布固定在固相载体上。

目前用作DNA微阵列原位合成的载体多为玻璃片和硅片,而聚丙烯膜、尼龙膜等高分子微孔膜,则大多用于点样法生物芯片的制备,这类膜作为芯片载体荧光背景强,过去必须采用同位素检测,因而不为人们所青睐。

聚丙烯微孔发泡,MPP片材,MPP

等离子体引发接枝是近年来出现的一种新型修饰方法,它能在短时间(数秒到几分钟)内通过辉光放电形成等离子体,直接将所需的功能基团接枝到膜上,与传统方法相比,具有工艺简单、操作方便.基膜和接枝单体选择范围广等优点。

选择微孔聚丙烯膜作为DNA芯片原位合成的载体,在氢气、氮气混合气氛中对该膜进行等离子体处理,经真空全反射红外光谱、X射线光电子能谱表征,证实在微孔聚丙烯膜上直接接枝了大量氨基。

等离子体接枝氨基效果的主要因素有处理时间和放电功率。如果膜片上一分子氨基与一分子的寡核苷酸发生偶联反应,随后所进行的脱DMT反应就有一分子的DMT被脱除下来,而DMT的稀溶液在酸性介质中符合郎伯-比尔定律,且在498nm左右有大吸收峰。

等离子体处理后表面变粗、孔径变大而清晰,这是由于等离子体中的离子、激发态分子和自由基等各种能量的粒子与材料表面进行多种相互作用,即利用H2和N2的等离子体进行表面反应,参与反应的有激发态分子、自由基和离子,也包括等离子体辐射紫外光的作用,通过表面反应在表面引入了氨基,并产生表面侵蚀,形成交联结构层或表面自由基。

这些结果进一步说明膜表面已接枝了氨基,至于酰胺基团的引入,则可能是等离子体处理后膜表面产生了活性自由基,进一步与空气中的氧作用的结果。还可以知道,直接轰击面吸收峰带明显比另一面强,表明其上接枝氨基的量较多。等离子体处理过程中既引入了含氮基团氨基又引入了酰胺基。

等离子体可在微孔聚丙烯膜上引发接枝氨基,用该方法改性的基材可直接进行DNA原位合成。从DMT溶液的紫外吸光度值和偶联效率来看,明显比目前使用的用氨基修饰的玻璃片基高,表明其合成的DNA探针密度远高于功能化玻璃,再加之其易于加工,有望成为一类DNA原位合成的新基材。


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